بررسی نقش نیتریک اکساید در تحمل به مرفین در موشهای صحرایی تخمدان برداری شده

اختصاصی از زد فایل بررسی نقش نیتریک اکساید در تحمل به مرفین در موشهای صحرایی تخمدان برداری شده دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

107 صفحه

در مطالعه حاضر نقش نیتریک اکساید در تحمل به مرفین در موشهای صحرائی تخمدان برداری شده مورد بررسی قرار گرفت. تعداد 90 سر موش صحرائی ماده تهیه و به 10 گروه تقسیم شدند. 1- گروه کنترل(Sham) 2- کنترل- تحمل Tol) Sham-) 3-گروه اوارکتومی (OVX)4 - گروه اوارکتومی – تحمل (Tol- OVX ) 6،5و 7-گروههای اوارکتومی تحت درمان با ال آرژنین(50،10 و200 Mg/kg) (Tol – LA) 8 و 9- گروههای اوارکتومی تحت درمان با ال نیم(10 و 50)         (Tol – LN). گروه های 3 تا 9 اوارکتومی شدند. 8 هفته بعد از تخمدان برداری، تحمل به مرفین در گروههای 2 و 4 تا 9 از طریق تزریق داخل صفاقی 20 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین در طی 4 روز ایجادشد. حیوانات گروه 6،5 و 7 همزمان با ایجد تولرانس 50،10 و 200 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن ال آرژنین دریافت کردند. حیوانات گروه 9 ، 8 همزمان با دریافت 20 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین، 10 و 50 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن ال نیم دریافت کردند. سنجش درد بوسیله تست صفحه داغ (Hot plate ) انجام گرفت. در روز پنجم، ابتدا از حیوانات ثبت پایه گرفته شد سپس حیوانات 5 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین دریافت کردند و اثرات ضد دردی هر 10 دقیقه بررسی شد.

نتایج نشان داد که زمان واکنش به درد بعد از تزریق 5 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین نسبت به زمان پایه در گروه کنترل و اوارکتومی بالا بود اما تفاوتی در گروههای کنترل – تحمل و اورکتومی – تحمل وجود نداشت. اگرچه زمان واکنش به درد بعد از تزریق 5 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین در گروه کنترل از گروه اوارکتومی بالاتر بود. اما تفاوتی بین گروههای کنترل- تحمل و اوارکتومی – تحمل مشاهده نشد.

Repeated measure AVOVA نشان داد که زمانهای واکنش بعد از تزریق 5 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین در گروه اوارکتومی –تحمل پایین تر از هر سه گروه دریافت کننده ال آرژنین بود که نشان دهنده این مطلب است که ال آرژنین تحمل به مرفین در موش های صحرایی اوارکتومی شده را کاهش می دهد. نتایج همچنین نشان داد که زمان واکنش به درد بعد از تزریق 5 میلی گرم به ازای هر کیلو گرم وزن بدن مرفین در گروه اوارکتومی- تحمل نسبت به گروههای دریافت کننده ال نیم پایین تر است. این یافته نشان می دهد که ال نیم نیز تحمل به مرفین در موشهای صحرایی تخمدان برداری شده را کاهش می دهد.

نتایج نشان می دهد که تکرار مصرف مرفین می تواند منجر به تحمل شود. اگر چه تفاوتی بین تحمل در حضور و یا عدم حضور هورمون های جنسی ماده وجود ندارد اما ال آرژنین و ال نیم تحمل به مرفین را کاهش می دهند.

کلمات کلیدی:موش صحرایی تخمدان برداری شده، نیتریک اکساید، ال آرژنین، ال نیم، تحمل.

فهرست

عنوان

صفحه

چکیده

فصل اول _ مقدمه

1-1 معرفی و بیان مسئله پژوهش

1-2 هورمونهای استروئیدی

1-2-1 محل ترشح هورمونهای جنسی زنانه

1-3 مکانیسم عمل استروژن

1-4 استروژن و سیستم عصبی

1-4-1 استروژن و نوروترانسمیترها

1-4-2 استروژن و سیستم کولینرژیک

1-4-3 استروژن و سیستم سرتونرژیک

1-4-4 استروژن و سیستم کاتیکولامینرژیک

1-5 استروژن و خلق و خوی

1-6 استروژن و

1-7 استروژن و گر گرفتگی

1-8 اثرات استروژن بر حافظه و یادگیری

1-9 استروژن و محافظت عصبی و بیماری آلزایمر

1-10 استروژن و بیماری پارکینسون

1-11 استروژن و درد

1-12 اپیوئیدها

1-12-1 گیرنده های اپیوئیدی

1-12-2 طبقه بندی اپیوئیدها

1-12-3 مکانیسم های سلولی عمل اپیوئیدها

1-13 بی دردی

1-14 پیامد های مصرف اپیوئیدها

1-15 مکانیسم های نورو شیمیائی تحمل نسبت به اپیوئیدها

1-16 نیتریک اکساید

1-16-1 سنتز و حذف نیتریک اکساید

1-16-2 مهار کننده آنزیم نیتروکساید سنتتاز

1-17 اعمال فیزیولوژیک نیتریک اکساید

1-18 اثرات هورمونهای گنادی بر سیستم های مرکزی تولید کننده نیتریک اکساید

1-19 اثر تنظیمی هورمونهای استروئیدی تخمدانی بر تولید نیتریک اکساید

21

1-17-1 شکل ظاهری معده

21

1-17-2 سطوح معده

22

1-18 عروق خونی معده

23

1-18-1 شرائین معده

23

1-18-2 وریدهای معده

23

1-19 عصب رسانی معده

24

1-20 غدد معدی

24

1-21 فعالیت حرکتی معده

25

1-22 فعالیت الکتریکی و انقباضات معده

26

1-23 ارتباط معده و دوازدهه

27

1-24 تنظیم تخلیه معده

28

1-25 نحوه ترشح اسید معده

29

1-26 کنترل غلظت اسید معده

31

1-27 مکانسیم سلولی آگونیستهای سلول پاریتال

31

1-28 آنتاگونیستهای ترشح اسیدمعده

32

1-29 کنترل in vivo میزان ترشح اسید

33

1-29-1 مرحله سری

33

1-29-2 مرحله معدی

33

1-29-3 مرحله روده ای

33

1-30 تحریک ترشح اسیدمعده

34

1-31 مهار ترشح اسید معده

34

فصل دوم _ روش کار

2-1 مواد و روشها

36

2-2 نحوه تجزیه و تحلیل داده هاو روش آماری

37

2-3 روشهای عصاره گیری

38

2-3-1 روش خیساندن

39

2-3-2 روش تراوش

39

2-3-3 روش هضم

40

2-3-4 روش جوشاندن

40

2-3-5 روش سوکسیله

41

2-4 روش بیهوشی

42

2-5 روش انجام آزمایش

43

2-6 روش اندازه گیری اسید نمونه

44

3-7 ترانسدیوسر

48

فصل سوم _ نتایج

3-1 داده های مربوط به ترشح اسیدمعده

49

3-2 داده ها یمربوط به فعالیت حرکتی معده

62

                                  فصل چهارم _ بحث و نتیجه گیری

4-1 نتایج مربوط به تاثیر گیاه بومادران بر ترشح اسیدمعده

83

4-2 نتایج مربوط به تاثیر گیاه بومادران بر حرکات معده

85

4-2-1 اثر بر فشار داخل معده

85

4-2-3 اثر بر دامنه انقباضات

85

4-2-3 اثر بر فرکانس انقباضات

86

پیشنهادات

88

منابع

89

   

بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac

اختصاصی از زد فایل بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

61 ص

- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector

2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12

3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector

4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39

5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector

6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین

7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C

8- سنجشهای ایمونولوژیک

باکتریها و پلاسمیدهایی که برای انجام این پایان نامه استفاده دشه اند بترتیب زیر می باشند:

باکتریها: بروسلاآبورتوس سویه های 19S و 544 اشدیشیالکی سویه

اشریشیالکی سویه BL21 – اشریشیاکی سویه BL21(DE3(Plyss

پلاسمیرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3

• جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S:

برای تکثیر ج داسازی ژنهای L7/L12 و P39 ابتدا کروموزوم باکتری جداسازی گردید.

مواد:

بافر TE:

Tris – Hel               10mm

EDTA          1.0mm

‍PH بافر را پس از تهیه برروی 8 تنظیم می نمائیم.

پروتئیناز K:

CTAB/NaCl:

Nacl                       4.1gr

CTAB          10gr

DDW                     100ml (Final Volume)

روش:

ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم. پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند. بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است:

1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم. محلول رویی را دور می ریزیم.

2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم. سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.

3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در 0C65 انکوبه می کنیم.

4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم. محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.

5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.

6- هم حجم محلول روئی ایزوپروپانل اضافه نموده و مخلوط می کنیم. پس از چند دقیقه DNA کروموزومی ته نشین شده که می توان بات یک پیپت پاستور آنرا جمع آوری نمائیم.

7- رسوب DNA کروموزومی را با الکل 70% شستشو داده و پس از خشک شدن در مجاورت هوا در Ml100 از بافر TE حل می نمائیم.

بررسی کمی و کیفی DNA کروموزومی:

برای تعیین خلوط کروموزوم باکتری از مواد و وسایل زیر استفاده میشود.